細(xì)菌內(nèi)毒素（Bacterial Endotoxins）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中脂多糖的主要成分，具有強(qiáng)烈的毒性，可能引發(fā)發(fā)熱、休克等嚴(yán)重反應(yīng)。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查是藥品和醫(yī)療器械質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)，通過嚴(yán)格的檢測方法，確保產(chǎn)品的安全性和合規(guī)性。本文將詳細(xì)介紹細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的原理、常用方法（尤其是LAL法）、國際標(biāo)準(zhǔn)以及檢測中的注意事項。

 

一、細(xì)菌內(nèi)毒素的基本概念

 

1.什么是細(xì)菌內(nèi)毒素？

細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌死亡或裂解后釋放出的脂多糖化合物，廣泛存在于自然環(huán)境中。

在藥品、醫(yī)療器械或生產(chǎn)過程中，若控制不當(dāng)，內(nèi)毒素可能污染產(chǎn)品，對患者造成危害。

2.危害性

生物學(xué)效應(yīng)： 引發(fā)發(fā)熱、炎癥反應(yīng)、低血壓甚至器官衰竭。

法規(guī)要求： 藥品、注射劑、植入性醫(yī)療器械必須進(jìn)行內(nèi)毒素檢測，確保安全性。

3.適用范圍

注射劑（如靜脈注射、皮下針劑）。

輸液器具和植入性醫(yī)療器械（如人工關(guān)節(jié)、心臟支架）。

生物制品（如疫苗、單克隆抗體）。

 

二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的原理

 

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的核心是利用鱟試劑（LAL，Limulus Amebocyte Lysate）的凝膠化或比色反應(yīng)來檢測樣品中的內(nèi)毒素濃度。

1.LAL法的反應(yīng)機(jī)制

鱟試劑中的酶和內(nèi)毒素特異性結(jié)合，激活凝固系統(tǒng)，產(chǎn)生可檢測的反應(yīng)。

根據(jù)檢測方法不同，可分為：

凝膠法： 凝固形成凝膠。

比濁法： 測定反應(yīng)液濁度變化。

比色法： 測定反應(yīng)液顏色變化。

2.內(nèi)毒素單位（EU）

檢測結(jié)果以EU/mL表示（內(nèi)毒素單位）。

每種產(chǎn)品都有特定的內(nèi)毒素限度要求（如USP、EP規(guī)定）。

 

三、細(xì)菌內(nèi)毒素檢測的主要方法

 

1.凝膠法

原理： 鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)后形成凝膠。

操作步驟：

1.將樣品與鱟試劑混合。

2.在37°C孵育60分鐘，觀察凝膠形成情況。

優(yōu)點： 簡單、直觀。

缺點： 靈敏度低，結(jié)果易受人為判斷影響。

2.比濁法

原理： 檢測反應(yīng)液濁度的變化，反映內(nèi)毒素濃度。

操作步驟：

1.樣品與鱟試劑混合后，放入分光光度計測定吸光度變化。

優(yōu)點： 自動化程度高，靈敏度高。

缺點： 需要專業(yè)儀器支持。

3.比色法

原理： 內(nèi)毒素催化底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，通過比色儀測定吸光度，計算內(nèi)毒素濃度。

操作步驟：

1.將樣品加入含有顯色底物的鱟試劑。

2.在分光光度計上檢測顯色強(qiáng)度，計算內(nèi)毒素含量。

優(yōu)點： 靈敏度高，定量精確。

缺點： 成本較高。

 

四、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的國際標(biāo)準(zhǔn)

 

1.USP <85>

美國藥典中規(guī)定了內(nèi)毒素檢測的操作方法、試劑要求和限度標(biāo)準(zhǔn)。

2.EP 2.6.14

歐洲藥典對內(nèi)毒素檢測方法和限度要求作出了詳細(xì)規(guī)定，適用于歐洲市場的藥品和器械。

3.中國藥典（ChP）2020版

明確規(guī)定了內(nèi)毒素檢查的適用范圍、檢測方法和限度標(biāo)準(zhǔn)，涵蓋凝膠法、比濁法和比色法。

 

五、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的注意事項

 

1.樣品預(yù)處理

去除干擾因子（如高分子物質(zhì)、pH 值偏差）。

必要時使用稀釋劑或中和劑處理樣品。

2.試劑與設(shè)備要求

試劑需經(jīng)過認(rèn)證（如USP標(biāo)準(zhǔn)鱟試劑）。

檢測設(shè)備（分光光度計、恒溫培養(yǎng)箱）需定期校準(zhǔn)。

3.環(huán)境控制

操作環(huán)境需符合無菌標(biāo)準(zhǔn)，避免外源性污染干擾檢測結(jié)果。

4.結(jié)果驗證

使用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素溶液驗證方法的靈敏度和可靠性。

每批次試劑使用前需進(jìn)行陽性對照試驗。

 

六、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的重要意義

 

1.保障產(chǎn)品安全

通過嚴(yán)格的內(nèi)毒素檢測，避免患者因注射內(nèi)毒素污染產(chǎn)品而發(fā)生嚴(yán)重反應(yīng)。

2.提升企業(yè)競爭力

符合國際標(biāo)準(zhǔn)的檢測流程和結(jié)果有助于提升產(chǎn)品的市場認(rèn)可度。

3.合規(guī)性要求

滿足藥監(jiān)部門的法規(guī)要求，降低因質(zhì)量問題引發(fā)的處罰和召回風(fēng)險。

4.優(yōu)化生產(chǎn)工藝

通過內(nèi)毒素檢測數(shù)據(jù)反饋，改進(jìn)生產(chǎn)工藝和環(huán)境控制水平。

 

七、結(jié)語

 

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查是確保藥品和醫(yī)療器械質(zhì)量與安全的關(guān)鍵步驟。通過科學(xué)的檢測方法、嚴(yán)格的操作規(guī)范和國際標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行，企業(yè)能夠有效控制內(nèi)毒素污染風(fēng)險，保障產(chǎn)品質(zhì)量。

在實際操作中，企業(yè)應(yīng)綜合考慮產(chǎn)品特性、檢測方法和法規(guī)要求，建立完善的內(nèi)毒素檢測體系，為患者提供安全、有效的產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。